WikiDer > TAE буфері

TAE buffer

TAE буфері Бұл буферлік ерітінді қоспасы бар Трис негізі, сірке қышқылы және EDTA.

Молекулалық биологияда ол агарозада қолданылады электрофорез әдетте бөлу үшін нуклеин қышқылдары сияқты ДНҚ және РНҚ.[1] Ол тұрады Трис-ацетат буфер, әдетте рН 8.3 және EDTA, ол екі валентті катиондарды бөліп алады. TAE-ге қарағанда буферлік сыйымдылық төмен TBE және тез шаршап қалуы мүмкін, бірақ сызықты, екі тізбекті ДНҚ TAE-де жылдамырақ өтеді.

Бұрын Brody & Kern электрофоретикалық буферлерді TBE және TAE буферлерін гельдік жүйелердегі тиімді және арзан өткізгіш орталарға алмастыру арқылы жеңілдеткен.[2]

Қолданады

TAE (Tris-acetate-EDTA) буфері жұмыс істейтін буфер ретінде де, агарозды гельде де қолданылады.[3] Оның денатураттау градиентінде қолданылуы гель электрофорезі кең ауқымды мутациялық талдау әдістері де сипатталған.[4] TAE ерітіндідегі ДНҚ-мен және онсыз қозғалғыштығын зерттеу үшін әртүрлі концентрацияда қолданылған натрий хлориді.[5] Алайда, ДНҚ үлгісіндегі натрий хлоридінің (және көптеген басқа тұздардың) жоғары концентрациясы оның қозғалғыштығын тежейді. Бұл нәтижесінде пайда болған ДНҚ-ның жолақтық схемасын дұрыс емес түсіндіруге әкелуі мүмкін.

Дайындық

TAE буфері әдетте зертханалық пайдалану үшін 50 × қор ерітіндісі ретінде дайындалады. 50 × қор ерітіндісін 242 г Трис негізін суда ерітіп, оған 57,1 мл мұздық сірке қышқылы және 100 мл 500 мМ EDTA (рН 8,0) ерітіндісін қосып, соңғы көлемін 1 литрге дейін жеткізіп дайындауға болады. Бұл қор ерітіндісін 1 × жұмыс жасайтын ерітінді жасау үшін сумен 49: 1 сұйылтуға болады. Бұл 1 × ерітіндіде 40 мМ Трис, 20 мМ сірке қышқылы және 1 мМ EDTA болады.

ЖоқАты-жөні1 мольғаНегізгі шешім50×1 × ерітінді1Х
1Трис негізі121,1 г / л2 М242,2 г / л40 мм4,844 г / л
2сірке қышқылы57,1 мл / л1 М57,1 мл / л20 мм1,21 мл / л
3EDTA натрий тұзы дигидраты372,24 г / л50 мм18,612 г / л1 мм0,372 г / л

2 М = 2000 мм, сондықтан 1 × үшін 2000 мм / 50 = 40 мм.
1М = 1000 мм, сондықтан 1 × үшін 1000 мм / 50 = 20 мм.
1 × үшін 50 мм / 50 = 1 мм.

Ең алдымен, бұл ингредиенттерді 500 мл-де еріту керек, содан кейін 1000 мл-ге дейін жасау керек.
Ескерту: EDTA-ны ерітуге көп уақыт кетеді, сондықтан EDTA-ны еріту кезінде магнитті араластырғышты қолданыңыз (EDTA-ның 3 немесе 4 рет аз мөлшері).

50 × TAE буферіне дайындық әдісінің рецепті protocols.io сайтында қол жетімді.[6]

Сондай-ақ қараңыз

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ Ogden, R.C., and Adams, D.A., (1987) Агарозадағы және акриламидті гельдердегі электрофорез. Ферменттер әдісі., 152:, 61-87.
  2. ^ Броди, Дж., Керн, С.Е. (2004) ДНҚ-ның стандартты электрофорезі үшін өткізгіш орта тарихы мен принциптері. Анал биохимиясы. 333(1):1-13. дои:10.1016 / j.ab.2004.05.054 PMID 15351274 PDF
  3. ^ Сэмбрук, Фрищ және Маниатис (1989) Молекулалық клондау: зертханалық нұсқаулық, 2-ші басылым, Cold Spring Harbor зертханалық баспасы, Cold Spring Harbor, Нью-Йорк, 3 том, B.11 және B.23 қосымшалары ISBN 0-87969-309-6
  4. ^ Хейз, В.М. және т.б., (1999) градиентті гельді электрофорезді денатурациялау арқылы кең ауқымды мутациялық талдау үшін гель құрамы мен электрофоретикалық жағдайды жақсарту. Нуклеин қышқылдары., 27(20): e29. PMID 10497279
  5. ^ Stellwagen, E., and Stellwagen, NC (2002) Трис-ацетат-EDTA буферлеріндегі ДНҚ-ның ерітінділердің еркін қозғалғыштығы, концентрациясы NaCl қосылған және қосылмаған. Электрофорез, 23(12): 1935-1941. PMID 12116139
  6. ^ Бехле, Анна; Павловский, Алиса. «50x TAE буферіне арналған рецепт». дои:10.17504 / protocols.io.gtvbwn6. Журналға сілтеме жасау қажет | журнал = (Көмектесіңдер)