WikiDer > Бір тізбекті айнымалы фрагмент

Single-chain variable fragment
Айқындалған комплементтілікті анықтайтын аймақтармен (CDR) айналатын scFv фрагменті
Бір тізбекті айнымалы фрагменттің екі мүмкін құрылымы, антигенді байланыстыратын учаскелері бар N-термини сол жақта және C-термині оң жақта. Байланыстырушы пептидтер көрсеткілер түрінде көрсетілген.

A бір тізбекті айнымалы фрагмент (scFv) іс жүзінде а емес фрагмент антидененің, бірақ оның орнына а балқымалы ақуыз аймақтарының өзгермелі ауыр (VH) және жеңіл тізбектер (VL) of иммуноглобулиндер, қысқа байланыстырғышпен байланысты пептид оннан 25-ке дейін аминқышқылдары.[1] Байланыстырушы әдетте бай болады глицин икемділік үшін, сонымен қатар серин немесе треонин ерігіштігі үшін және қосуға болады N-терминал VH бірге C терминалы VL, немесе қарама-қарсы.[2]Бұл белок тұрақты аймақтарды алып тастап, сілтеме енгізгенімен, бастапқы иммуноглобулиннің ерекшелігін сақтайды.[3] Оң жақтағы сурет осы модификацияның ерекшелігін өзгертпестен қалай қалдыратынын көрсетеді.

Бұл молекулалар жеңілдету үшін жасалған фаг дисплейі, мұнда өрнекті білдіру өте ыңғайлы антигенмен байланысатын домен бір пептид ретінде. Балама ретінде scFv-ді тікелей құруға болады субконлонды а-дан алынған ауыр және жеңіл тізбектер гибридома. ScFvs көптеген қолданыстарға ие, мысалы, ағындық цитометрия, иммуногистохимия, және антигенмен байланысатын домендер ретінде жасанды Т-жасушалық рецепторлар (химерлі антиген рецепторы).

Айырмашылығы жоқ моноклоналды антиденелер, олар көбінесе сүтқоректілердің жасуша дақылдарында өндіріледі, scFvs бактериялар сияқты көбінесе жасуша дақылдарында жасалады E. coli.[3]

Тазарту

Бір тізбекті айнымалы фрагменттерде тұрақты болмайды ФК аймағы толық антидене молекулаларында және, демек, жалпы байланысатын орындарда (мысалы, ақуыз G) антиденелерді тазарту үшін қолдануға болмайды. Бұл фрагменттерді көбінесе тазартуға немесе иммобилизациялауға болады ақуыз L, өйткені L протеині каппа жеңіл тізбектерінің айнымалы аймағымен әрекеттеседі. Көбінесе, ғалымдар scFv молекуласының с-терминалына алты гистидинді қосады және иммобилизацияланған металға жақындық хроматографиясы (IMAC) көмегімен оларды тазартады. Кейбір scFv-ді де түсіруге болады ақуыз А егер оларда адамның VH3 домені болса. [4]

Екі валентті және үш валентті scFvs

Екі валентті (жоғарғы) және үш валентті (төменгі) құрылымдар, тандем (сол жақта) және ди-/ тримеризация форматы (оң жақта)

Дивалентті (немесе екі валентті) бір тізбекті айнымалы фрагменттерді (di-scFvs, bi-scFvs) екі scFv байланыстыру арқылы құрастыруға болады. Мұны екі В-қа тең бір пептидтік тізбекті шығару арқылы жасауға боладыH және екі В.L өңірлер, өнім береді тандемдік scFvs.[5][6] Тағы бір мүмкіндік - бұл екі ауыспалы аймақтың бірігіп кетуі үшін өте қысқа линкер пептидтерімен (шамамен бес аминқышқылдары бар) scFv-ді құру, scFv-ді азайтуға мәжбүр етеді. Бұл түрі ретінде белгілі диабодиялар.[7] Диабодиялардың бар екендігі көрсетілген диссоциация тұрақтылығы сәйкес scFv-ге қарағанда 40 есе төмен, бұл олардың әлдеқайда жоғары екендігін білдіреді жақындық олардың мақсатына. Демек, диабодты дәрі-дәрмектерді басқа терапевтік антиденелерге қарағанда әлдеқайда төмен мөлшерлеуге болады және in vivo жағдайында ісіктерді жоғары спецификациялауға қабілетті.[8] Әлі де қысқа сілтемелер (бір немесе екі амин қышқылы) тримерлердің пайда болуына әкеледі триабодиялар немесе триодиялар. Тетрабодиялар өндірілген. Олар диабодияларға қарағанда өз мақсаттарына анағұрлым жоғары жақындығын көрсетеді.[9]

Бұл форматтардың барлығы екі түрлі антигенге тән ерекшелігі бар айнымалы фрагменттерден тұруы мүмкін, бұл жағдайда олар екі түрлі антиденелер.[10][11] Осылардың ішіндегі ең дамыған түрлері - белгілі екі типті тандем ди-scFvs екі спецификалық Т-жасушалар (BiTE антидене құрылымдары).

Мысалдар

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ Хьюстон, Дж. С .; Левинсон, Д .; Муджетт-Хантер, М .; Тай, М.С .; Новотный, Дж .; Марголиес, М. Н .; Crea, R. (1988). «Антиденелерді байланыстыратын учаскелердің ақуыздық инженериясы: ішек таяқшасында өндірілген анти-дигоксинді бір тізбекті Fv аналогында белсенділіктің қалпына келуі». Америка Құрама Штаттарының Ұлттық Ғылым Академиясының еңбектері. 85 (16): 5879–5883. Бибкод:1988PNAS ... 85.5879H. дои:10.1073 / pnas.85.16.5879. PMC 281868. PMID 3045807.
  2. ^ Ширрман, Томас (8 қараша 2004). «Tumorspezifisches Targeting der humanen Natürlichen Killerzellinie YT durch Gentransfer chimärer Immunglobulin-T-Zellrezeptoren» (неміс тілінде). Берлин.
  3. ^ а б Питерсон, Эрик; Оуэнс, СМ; Генри, RL (2006). «Моноклоналды антидененің нысаны және қызметі: нашақорлықты емдеуге арналған дұрыс антиденелерді өндіру». AAPS журналы. 8 (2): E383-E390. дои:10.1208 / aapsj080243. PMC 3231570. PMID 16796389.
  4. ^ Поттер, К.Н .; Ли, Ю .; Паскуаль, V .; Capra, J. D. (1997). «VH3 кодталған иммуноглобулиндермен байланысатын стафилококк ақуызы». Иммунологияның халықаралық шолулары. 14 (4): 291–308. дои:10.3109/08830189709116521. PMID 9186782.
  5. ^ Сионг, Чэн-И; Натараджан, А; Ши, ХБ; Денардо, ГЛ; Денардо, СЖ (2006). «Анти-MUC-1 мультиметріне бағытталған ісіктің дамуы: ди-scFv жұпталмаған цистеиннің орналасуының ПЕГиляцияға және ісікті байланыстыруға әсері». Ақуыздарды жобалау және таңдау. 19 (8): 359–367. дои:10.1093 / ақуыз / gzl020. PMID 16760193.
  6. ^ Куфер, Петр; Лютербюс, Ральф; Бэурле, Патрик А. (2004). «Екіжақты антиденелердің жандануы» (PDF). Биотехнологияның тенденциялары. 22 (5): 238–244. дои:10.1016 / j.tibtech.2004.03.006. PMID 15109810.
  7. ^ Холлингер, Филипп; Просперо, Т; Winter, G (1993 ж. Шілде). ""Диабодиялар «: кішкентай екі валентті және екі түрлі антидене фрагменттері». Америка Құрама Штаттарының Ұлттық Ғылым Академиясының еңбектері. 90 (14): 6444–8. Бибкод:1993 PNAS ... 90.6444H. дои:10.1073 / pnas.90.14.6444. PMC 46948. PMID 8341653.
  8. ^ а б Адамс, дәрігер; Schier, R; МакКолл, AM; Кроуфорд, RS; Қасқыр, Э.Дж; Вайнер, LM; Маркс, ДжД (1998). «Адамның жасушадан тыс HER2 / neu жасушалық доменіне бағытталған диабодты ұзақ уақыт бойы in vivo ісік ұстауы». Британдық қатерлі ісік журналы. 77 (9): 1405–12. дои:10.1038 / bjc.1998.233. PMC 2150193. PMID 9652755.
  9. ^ Ле Галл, Ф .; Киприянов, СМ; Молденгауэр, Г; Кішкентай, М (1999). «Адамның CD19-ға қарсы ди-, три-және тетрамерлі бір тізбекті Fv антидене фрагменттері: валенттіліктің жасушалардың байланысуына әсері». FEBS хаттары. 453 (1): 164–168. дои:10.1016 / S0014-5793 (99) 00713-9. PMID 10403395. S2CID 20213440.
  10. ^ Динк, С; Босман, Ф; Buyse, MA; Дегрик, Р; Celis, L; Де Бур, М; Ван Дорсселаере, V; Саблон, Е (2001). «CD80 / CD86-CD28 костимуляторлық жолын блоктайтын антиденелерден алынған моноспецификалық және биспецификалық рекомбинантты антидене фрагменттерін білдіру және тазарту». Ақуыздың экспрессиясы және тазалануы. 22 (1): 11–24. дои:10.1006 / prep.2001.1417. PMID 11388794.
  11. ^ Келлнер, С (2008). «Entwicklung und Charakterisierung bispezifischer Antikörper-Derivate zur Immuntherapie CD19-позитивті Leukämien und Lymphome» [CD19-позитивті лейкемия мен лимфоманың иммунотерапиясына арналған анти-антидене туындыларын жасау және сипаттамасы] (неміс және ағылшын тілдерінде). Эрланген-Нюрнберг: Фридрих-Александр-Университет.
  12. ^ Мэттью, Дж.П.; Шернан, СҚ; Ақ, WD; Fitch, JC; Чен, БК; Bell, L; Ньюман, МФ (2004). «Пекселизумабпен комплементті басудың коронарлық артерияны айналып өту операциясынан кейінгі нейрокогнитивті құлдырауға әсері туралы алдын-ала есеп». Инсульт: церебральды айналым журналы. 35 (10): 2335–9. дои:10.1161 / 01.STR.0000141938.00524.83. PMID 15331798.